Метод определения эксцизионных колец ДНК Т- и В-клеточного рецептора (TREC/KREC) методом мультиплексной ПЦР в реальном времени.

Метод предусматривает выделение ДНК из анализируемого образца крови, одновременную амплификацию участков молекул ДНК TREC, KREC и нормировочного локуса, постоянно присутствующего в единичном экземпляре в каждом цикле амплификации, осуществляемой с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР). При этом регистрируют полученные результаты посредством гибридизационно- флуоресцентной детекции, определяют в режиме реального времени абсолютное количество молекул TREC, KREC и нормировочного локуса в анализируемом образце ДНК с помощью калибровочных кривых, и по результатам оценки их количества производят диагностику состояния иммунной системы пациента.

Конкурентные преимущества перед аналогами

В отличие от известных способов диагностики состояния иммунной системы пациента на основе оценки количества наивных Т и В клеток новым является то, что выделяют ДНК из анализируемого образца крови, затем производят одновременную амплификацию участков молекул ДНК TREC, KREC и нормировочного локуса, с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР), проводимой в общей емкости при одинаковых условиях для всех амплифицируемых молекул и в присутствии олигонуклеотидных флуоресцентно меченых зондов, несущих на 5'-конце флуорофоры и на З'-конце не флуоресцентный тушитель, комплементарных центральной части амплифицируемых фрагментов, регистрируют полученные результаты посредством гибридизационно-флуоресцентной детекции, определяют в режиме реального времени абсолютное количество молекул TREC, KREC и нормировочного локуса в анализируемом образце ДНК с помощью калибровочных кривых, построенных при амплификации стандартных образцов ДНК, взятых не менее чем в 4-х последовательно убывающих десятикратных разведениях известных концентраций, и по результатам оценки их количества производят диагностику состояния иммунной системы пациента.

Основные публикации